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揭秘沙門菌血清鑒定的黑科技:實時熒光PCR技術的革命性應用!

2024-08-16 09:22:18

沙門菌是***種較常見的食源性腸道致病菌,是腸桿菌科中***復雜的菌屬,其抗原結構主要由菌體抗原( O 抗原) 、鞭毛抗原( H 抗原) 及表面抗原( Vi 抗原等) 3 部分組成。根據各抗原組成的不同,可將沙門菌分為不同的血清型,目前已確認的有2600多種血清,我***已檢出 300 余種。


由沙門菌引起的感染性疾病是***個世界性健康難題,對全球特別是發(fā)展中******構成嚴重威脅,被世界衛(wèi)生組織列為具有嚴重危害或中等危害的食源性病原菌。


由不同血清型沙門菌引發(fā)的疾病類型會有所差異,沙門菌血清型的準確快速鑒定對暴發(fā)流行中的溯源分析具有重要意義。


***近看到***篇由王雅靜,管紅霞,沙丹等撰寫的專業(yè)論文《實時熒光PCR檢測技術在沙門菌血清鑒定中的應用》,研究對比實時熒光PCR法和傳統(tǒng)的玻片凝集法在實驗操作、檢測成本及靈敏度等方面的差異了解實時熒光PCR 檢測技術在沙門菌血清分型中的實際應用價值。


研究方法


選取 2010—2015 年無錫市健康從業(yè)人員腸道分離得到的 144 株沙門菌,分別采用傳統(tǒng)玻片凝集法和實時熒光 PCR 法()進行血清分型,以前者為金標準,比較兩種方法的***致性。

研究結果



144 株沙門菌利用傳統(tǒng)玻片凝集法均可分型,共鑒定出 28 個型別。兩種方法鑒定結果***致的有 134 株菌,符合率為93. 06%,Kappa 值為 0. 68,具有高度***致性



采用實時熒光 PCR 法鑒定沙門菌血清型,結果與金標準的玻片凝集法具有高度***致性。有10 株菌株檢測結果與玻片凝集法不***致,可能與致病菌自身部分待測基因環(huán)境或宿主的改變發(fā)生突變,進而基因組呈現(xiàn)多樣性有關。


4 種沙門菌優(yōu)勢血清型兩種方法分型結果完全***致,且此血清型分布與 2017年無錫市食品行業(yè)從業(yè)人員沙門菌血清分布基本***致。


玻片凝集法VS實時熒光PCR法


玻片凝集法直觀且可靠性高,是目前公認的沙門菌血清分型金標準。但耗時長,操作過程復雜,需嘗試的血清診斷試劑較多,鑒定成本高,常要受制于試劑種類與質量優(yōu)劣,且需多次誘導時具有***定鑒定難度。


部分粗糙型自凝性沙門菌利用玻片凝集法不能進行分型。個別情況下沙門菌的抗原與血清凝集反應程度較弱,對實驗人員經驗和操作水平要求高


實時熒光PCR法是基于目標基因簇中特定區(qū)域或基因片段,操作簡單,不易出現(xiàn)差,對普通實驗人員來說從分離培養(yǎng)、提取核酸到檢測、記錄 Ct 值、確定血清分型***多僅需要 1 d,且常規(guī)的***塊 96 孔 PCR 板可以同時檢測 8 份樣本,極大縮短了檢測時間


但實時熒光 PCR 法對***些不常見、存在交叉情況的血清型鑒定時,尚無法準確判斷沙門菌血清型。


實時熒光 PCR 法成本為 100 元/份,操作簡單,耗時僅 1 d; 玻片凝集法成本為 300 元/份,操作復雜,耗時 3~5 d。


如何選擇和應用此兩種方法?


實時熒光 PCR 法對沙門菌進行血清分型與玻片凝集法鑒定結果***致性高,且檢測時間較短,操作簡單。


1. 對于多數常見的沙門菌菌株的分型鑒定,采用實時熒光 PCR 檢測技術效果良好,尤其當檢測量較大時,檢測效率較高。


2. 對較不常見或血清型存在交叉的菌株,在實時熒光 PCR 法的基礎上,再有針對性地進行凝集試驗,可省去逐***用血清試劑做凝集反應的繁瑣步驟,建議兩種方法聯(lián)合使用,可提高沙門菌血清分型檢測效率。


本來內容來源:王雅靜,管紅霞,沙丹,等.實時熒光PCR檢測技術在沙門菌血清鑒定中的應用[J].江蘇預防醫(yī)學,2023,34(01):105107.DOI:10.13668/j.issn.10069070.2023.01.032.

僅供學習,版權歸原作者所有。

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