約翰-塞巴斯蒂安-普洛姆（Johann Sebastiaan Ploem）于 1927 年出生在蘇門答臘島的澤蘭托（Sawahlunto），是***名荷蘭煤礦工程師的兒子。幼年時(shí)，他隨父母回到荷蘭，并在那里將繪畫作為自己的愛好之***。高中畢業(yè)后，他發(fā)現(xiàn)了另***個(gè)令人著迷的色彩領(lǐng)域，我們稍后會(huì)了解到。Ploem 決定學(xué)習(xí)醫(yī)學(xué)，并在烏得勒支、哈佛和阿姆斯特丹接受教育。隨后，他開始了學(xué)術(shù)生涯，曾在邁阿密大學(xué)和阿姆斯特丹大學(xué)工作，后晉升為荷蘭萊頓大學(xué)醫(yī)學(xué)系教授。

在研究活動(dòng)中，他發(fā)現(xiàn)熒光顯微鏡是***種強(qiáng)大的工具。20 世紀(jì) 60 年代，***種特殊的標(biāo)本照明方式開始流行，事實(shí)上，早在 1925 年，對(duì)絲蟲自發(fā)熒光事件感興趣的 Policard 和 Paillot 就已經(jīng)知道并描述了這種照明方式（Policard 和 Paillot，1925 年）。***些研究人員重新啟動(dòng)了這兩位法***科學(xué)***的項(xiàng)目，將熒光照明和樣品檢測(cè)放在顯微鏡的同***側(cè)。這種利用入射光的原理被稱為 "Epi-Illumination"，與透射顯微鏡形成鮮明對(duì)比。在熒光顯微鏡中使用這種技術(shù)的***大好處是可以避免檢測(cè)光源發(fā)出的發(fā)射光（圖 1）。另***個(gè)優(yōu)點(diǎn)是機(jī)械性更強(qiáng)：在透射照明中，聚光器和物鏡有兩個(gè)獨(dú)立的光軸，必須仔細(xì)對(duì)準(zhǔn)。而在外延照明中，物鏡既是聚光器，又是集光物鏡。這樣就可以避免對(duì)準(zhǔn)問題。

早在幾年前，前蘇聯(lián)的兩位研究人員就為熒光外延照明顯微鏡提供了非常重要的投入。Brumberg 和 Krylova 開發(fā)了***種所謂的二向色分光器，用于入射光的紫外激發(fā)（Brumberg 和 Krylova，1952 年）。

二向色材料能夠讓特定波長(zhǎng)范圍的光通過，而其他波長(zhǎng)的光則被反射（圖 2）。

這***原理對(duì)于熒光外延照明是不可或缺的，因?yàn)榧ぐl(fā)光必須以某種方式融合到顯微鏡的光路中（圖 3）。更確切地說，二向色分光鏡無(wú)法穿透光源發(fā)出的所需激發(fā)光的波長(zhǎng)，只能將激發(fā)光反射到樣品上。樣品發(fā)出的熒光反過來(lái)又可以通過二向色分光器到達(dá)檢測(cè)端。

有鑒于此，現(xiàn)在可以利用外延照明的優(yōu)勢(shì)，使用普通的高壓汞弧光燈提供藍(lán)光和綠光的窄帶激發(fā)。這***改進(jìn)滿足了生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)晒怙@微鏡的需求。

根據(jù) Ploem 的發(fā)明，Leitz 設(shè)計(jì)出了***種新型多波長(zhǎng)熒光外延照明器，它帶有四個(gè)旋轉(zhuǎn)式二向色分光鏡，可在紫外、紫光、藍(lán)光和綠光范圍內(nèi)激發(fā)標(biāo)本，這就是 Leitz PLOEMOPAK。

萊茨員工卡夫（W. Kraft）取得了更大的成就，他將二向色分光器與適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)和發(fā)射濾光器組合在***個(gè)工件上，即所謂的濾光器立方體或?yàn)V光器塊（卡夫，1969 年和卡夫，1972 年）（圖 6）。他的研究成果是設(shè)計(jì)出了***種外延照明器，該照明器帶有多組四個(gè)這樣的濾光器立方體，如今幾乎所有的多波長(zhǎng)熒光顯微鏡都是以這些濾光器立方體為基礎(chǔ)的。